Giới thiệu kỹ thuật nuôi cấy mô( in vitro) trên cây sầu riêng: Cây sầu riêng là một loại cây rất có giá trị ở vùng nhiệt đới. Các giống sầu riêng của Thái Lan hiện rất vượt trội so với giống sầu riêng ở Việt Nam, nhờ họ áp dụng công nghệ cao vào kỹ thuật nuôi cấy. Bằng cách áp dụng kỹ thuật nuôi cấy in-vitro cây sầu riêng có thể cải thiện được chất lượng giống hiện tại của Việt Nam.
PHƯƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG SẦU RIÊNG BẰNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT
Nuôi cấy mô trên cây sầu riêng là cách nhân giống nhanh nhất để cho ra đồng loạt với số lượng lớn và sạch bệnh. Các phương pháp nhân giống sầu riêng truyền thồng như gieo hạt và chiết ghép đem lại hiệu suất không bằng phương pháp nuôi cấy mô.
Các phương pháp nuôi cấy mô sầu riêng từ cách chọn mẫu:
Đối với phương pháp nuôi cấy mô trên cây sầu riêng cũng có nhiều con đường khác nhau để lựa chọn: Chọn mẫu từ chồi nách, nuôi mô sẹo từ lá, hoặc nuôi phôi lên từ hạt sầu riêng.
Vô trùng mẫu sầu riêng:
Ở bước vô trùng mẫu sầu riêng ta tiến hành theo phương pháp sau: Rửa sạch mẫu bằng nước vòi trước, cho mẫu dưới nước vòi khoảng 10-15 phút, rồi ngâm trong nước xà phòng 3- phút, rửa lại bằng nước tiệt trùng, đem vô buồng cấy, ngâm trong cồn 70 độ trong vòng 3 phút, rồi rửa bằng nước tiệt trùng 3 lần, sau đó ngâm trong muối thuỷ ngân(HgCl2) 0.5% trong 8-10 phút sẽ đem lại kết quả vô trùng tốt nhất.
Nuôi cấy từ mẫu chồi nách:
Đối với mẫu chồi nách sau khi đã vô trùng ta sử dụng môi trường Woody plant medium kết hợp với cytokinins để cho chúng phát triển bằng con đường phát triển chồi. Cytokinins ở lần này có thể sử dụng 2iP, 6-BAP hoặc Kinetin. 2iP sử dụng cho cây sầu riêng đem lại kết quả tốt nhất với tỷ lệ là 1mg/L, đem lại tỷ lệ sống sót cao hơn hết, các màu mô từ nâu chuyển sang xanh cho thấy chúng đang hồi sinh rất nhanh khi sử dụng 2iP.
Nuôi cấy từ mẫu lá:
Nếu ta sử dụng mẫu lá tạo ra mô sẹo thì áp dụng môi trường Woody plant medium kết hợp với 0.5 mg/L 2,4 D với 0.1 mg/l 6-BAP. Sau khi ta có được mô sẹo thì tái sinh chồi chúng với tỷ lệ hormone như đoạn trên.
Nuôi cấy từ hạt sầu riêng:
Ngoài ra ta còn có thể sử dụng hạt sầu riêng để vô mẫu, có thể cho hạt lên chồi hoặc cũng có thể cho hạt tạo ra mô phôi. Môi trường nuôi phôi tốt nhất là MS + GA3 1mg/L + 6-BAP 3mng/L sau 12 tuần sẽ cho ra phôi dài khoảng 6.2 cm.
a. Môi trường tạo chồi: MS + GA3 1mg/L + 6-BAP 3mg/L
b. Môi trường tạo rễ: MS + GA3 1mg/L + 6-BAP 2mg/L.
Một gợi ý khác:
Một bài nghiên cứu khác có đề cập phương pháp tạo mô sẹo tư lá non. Phương pháp khử trùng được tiến hành như sau: mẫu lá rửa các lá dưới nước máy, sau đó rửabằng dung dịch diệt khuẩn 2% (Agrept) và 2% dung dịch chống nấm (Benlate) trong 30 phút, sau đó rửa bằng nước vô trùng 3 lần, tiếp theo là tiệt trùng phân tầng trong NaClO 1,5% Trong 30 phút, 1,0% trong 10 phút và 0,5% trong 5 phút. Mẫu sau đó được rửa sạch bằng nước vô trùng, và các bộ phận bị thương đã được cắt trước khi được cho vào môi trường nuôi cấy.
Môi trường tạo ra mô sẹo trong phương pháp này là Woody plant medium + Picloram 3mg, giai đoạn này thường kéo dài từ 34-43 ngày.
Nguồn:
Sterilization Method For In Vitro Propagation Explant Embryo Of Durio Kutejensis (Hassk.) & Becc From Kalimantan.
Callus Proliferation from Immature Leaf Explants of Durian (Durio zibethinus Murr. cv. Selat) with the Addition of Picloram and BAP.
Media for Embryo Culture of Some Tropical Recalcitrant Species, 1988